1称取新鲜叶片2-3g,剪碎放入研钵中,在液氮中研磨成粉末。2将粉末转移到的加有7m1经预热的15XCTAB提取缓冲液15ml离心管中,迅速混匀后置于65°C水浴中,温育30min。3取出离心管,冷却至室温,南宫28娱乐平台加入氯仿/异戊醇(24:1),充分混匀,室温下2300X目离心20min。4将上清转移至另一新的15m1离心管中,加入1/10体积10%的CTAB和等体积的氯仿/异戊醇。充分混匀,2300x目离心20min。5转移上清至另一新的15ml离心管中,加入等体积1%的CTAB沉淀缓冲液,轻轻摇晃至形成DNA絮状沉淀。1000Xg离心10min,使DNA沉淀于管底。6加入15-2m1的1mo1/LNaC1及5p1RNase置于56C水浴中过夜。待DNA完全溶解后,加2-3m14C预冷的95%的冰乙醇使DNA沉淀,挑出DNA,置于15m1离心管中,用70%乙醇清洗30min,用离心机甩5s,倒出70%乙醇,再用95%乙醇浸泡5min,倒出95%乙醇,在超净工作台上吹干。7将风干的DNA直接在4C保存备用或溶于100M1TE溶液中于-20C保存。
1取2-3g新鲜叶片,在液氮中研磨成粉状(防止溶化)后转入15m1离心管中。2加入5m1于65C预热的提取缓冲液,65C水浴保温30min(摇动数次),使提取液与样品充分混合。3加入2m15mo1/LKAc,剧烈振荡,冰浴保温20min以上。42700Xg离心20min,将上清液倒入新的15m1离心管中,(若提取DNA用于Southern等实验,一般在转移上清时加滤膜,防止样品残渣混入,可保证DNA纯度)。5加入4m1氯仿/异戊醇(24:1),摇匀,平衡,2700X目离心15min°6在另一新的15m1离心管中加入5m1预冷的异丙醇,将上清液用移液枪转入此管,在-20C冷却30min以上。72700X目离心10min,弃去上清液,用4m170%乙醇洗涤,室温保持10min。2700X目离心3min,倒去上清液。8重复步骤7,用4m170%乙醇洗涤,室温保持10min。2700Xg离心3min,倒去上清液。超净工作台内吹干(3h左右)。9加1m1TE缓冲液中溶解,加10p1RNase(10mg/m1),在37C恒温箱中温育20min。10再加100p13mo1/LNaAc和2m1无水乙醇,2700X目离心3min,倒去上清液。超净工作台内吹干(3h左右)。11将DNA沉淀溶于150p1TE中,置于超净工作台内(3h左右)。将TE溶
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