在所有成分的有效期限内，在2°C至8°C的黑暗环境中储存，可稳定长达4周。
1、基质胶包被培养板：取出6孔板/12孔板，每孔内加入1mL/0.5mL即用型基质胶(abs9410)，轻轻晃动6孔板/12孔板使基质胶wan全覆盖皿底，置于37℃培养箱中孵育1h-2h，实验前拿出并置于超净工作台/生物安全柜中室温下平衡20min。如果暂时不用，可用Parafilm封口后2-8℃储存，并于1周内使用。
2、在使用前，将已经平衡好的即用型基质胶弃掉，然后加入预热的wan全NSC培养基。
3、在每个培养瓶中加入1.0mL预热的人多能干细胞消化液(abs9409)，然后在室温下孵育2-5min。在孵育前确保wan全覆盖细胞。
6、加入9mL预热好的NSC wan全培养基停止细胞解离反应，然后将细胞悬液转移到无菌离心管中。
10、从每个覆盖层培养瓶中除去覆盖层溶液，然后加入5mL预热的NSCwan全培养基，添加Y27632（终浓度10μM）。
11、在每个培养瓶中加入5×104细胞/cm2(例如，1.25×106细胞/T-25培养瓶)，然后混合或旋转细胞悬液以确保均匀分布。
注：为了获得最佳性能和细胞生长，每2-3天更换一次培养基，用新鲜的预热的NSCwan全培养基。
3、在离心过程中，计算细胞密度为2×106个活细胞/mL所需的最终体积。
7、按照标准程序（每分钟降低1°C）在自动或手动控制速率的冷冻设备中实现低温保存。
3、小心滴加（每秒1滴），加入4mL预热好NSC wan全培养基，然后轻轻旋转离心管混合。
6、加入5mL预热好NSC wan全培养基重悬细胞沉淀，然后添加Y27632（终浓度10μM），再将离心管的全部内容物转移到包被的组织培养瓶中。
注：为了恢复在NSC中生长的细胞，我们建议在初始传代时以≥1×105个细胞/cm2的密度接种细胞。
CO2培养箱、双人单面超净台、倒置显微镜、台式冷冻离心机、水浴锅(abs72023)或水浴摇床、医用冰箱、-80℃冰箱、移液器（一套）。
消化收集神经干细胞团到15mL离心管，于300g 4℃富集离心5min后移去上清。
密度建议1：基质胶体积：细胞团沉淀体积=25:1（如果估摸细胞团沉淀体积困难，通常加300uL基质胶足够）
密度建议2：500个细胞团/25uL基质胶（如果想计数接种，可以参照此密度建议）
向细胞团沉淀加入基质胶(abs9495)，进行吹打混匀（不要满吹满打，容易产生气泡），然后进行点板。整个操作在金属冰盒或冰上进行。操作熟练以后，加胶，混匀，点板控制在半分钟内，有利于保持基质胶良好的流畅性。
将铺好的培养板放入37℃培养箱中40-60min成胶，添加500-750μL类器官培养基A进行培养。大概10-14天，多数类器官直径在200um-500um，可进行传代操作。
1）收集：移液器吸去培养基，每孔添加1-2mL左右4℃类器官传代培养缓冲液G，轻柔吹散基质胶，收集在15mL离心管中（24孔板，每5孔为一组）。
2）洗涤：加类器官传代培养缓冲液G定容至14mL（缓冲液越多，基质胶被稀释的越充分，越容易去除），4℃静置40min或-20℃放置5min（目的是使基质胶软化，如果冰箱保温效果强，缩短冷冻时间，摸索合适的冷冻时间时，可取出离心管摇晃看不到基质胶说明冷化好了）。
3）接下来将离心管进行300g，4℃，离心5min，离心完通常会有这两种情况：
第一种是正常情况，分成三层（如下图），此时弃掉上清和基质胶层，保留类器官沉淀即可。
第二种是不正常情况，分成两层（如下图），这种情况可能与冷化不充分有关。此时弃掉缓冲液，留下基质胶类器官混悬液，重复上一步洗涤步骤，再次冷化离心，通常能出现清晰分层（缓冲液层、基质胶层、类器官沉淀层），此时弃掉上清和基质胶层，保留类器官沉淀即可。如果依然是两层（缓冲液层和基质胶类器官混悬液层），此时弃掉缓冲液和上1/3的基质胶类器官混悬液，保留下2/3即可。
a 离心机的选择非常重要，水平角离心机相比固定角离心机更利于基质胶和类器官分离；
b 离心机的温度最好是4℃（可避免基质胶固化），离心转速可适当提高（最高不要超过500g），离心时间可适当加长（最常不超过10min）。
1）添加2-3mL类器官传代消化液D于超净台内消化2-3min，消化期间吹打1-2次。此步骤以消化成细胞团为主，千万不要消化成单细胞，单细胞类器官存活率低。如果不确定是否消化适宜，可吸取数微升镜下观察，如果有较多细胞团可停止消化。
2）添加5倍类器官传代培养缓冲液G（缓冲液：消化液=5:1）终止消化，300g 4℃离心5min弃去上清（如果有基质胶残留，残留量50uL正常，不影响传代类器官增殖）
密度建议1：类器官通常按1:2传代，例如，24孔板收集5孔，传代10孔，需要的基质胶量25*10=250uL
密度建议2：500个细胞团/25uL基质胶（如果想计数接种，可以参照此密度建议）
注意：不管是按密度建议1还是，密度建议2，如果有残留的基质胶，新胶量至少是残留胶量的1.5倍
向细胞团沉淀加入基质胶(abs9495)，进行吹打混匀（不要满吹满打，容易产生气泡），南宫28官网然后进行点板。整个操作在金属冰盒或冰上进行。操作熟练以后，加胶，混匀，点板控制在半分钟内，有利于保持基质胶良好的流畅性。
将铺好的培养板放入37℃培养箱中40-60min成胶，添加500-750μL人肠癌类器官培养基 A进行培养。大概10-14天，多数类器官直径在200-300um，可进行传代操作。
1）移液器吸去培养基，每孔添加1-2mL左右4℃类器官传代培养缓冲液G，轻柔吹散基质胶。
2）进行吹打，将类器官吹成细胞团（可取样镜下观察有较多细胞团时可停止吹打）；
3）洗涤： 24孔板，每5孔为一组，收集在15mL离心管中，加类器官传代培养缓冲液G定容至14mL（缓冲液越多，基质胶被稀释的越充分，越容易去除），4℃静置 40min或-20℃放置5min（目的是使基质胶软化，如果冰箱保温效果强，缩短冷冻时间，摸索合适的冷冻时间时，可取出离心管摇晃看不到基质胶说明冷化好了）。
4）接下来将离心管进行300g，4℃，离心5min，离心完通常会有这两种情况：
第一种是正常情况，分成三层（如下图），此时弃掉上清和基质胶层，保留细胞团沉淀即可。
第二种是不正常情况，分成两层（如下图），这种情况可能与冷化不充分有关。此时弃掉缓冲液，留下基质胶类器官混悬液，重复上一步洗涤步骤，再次冷化离心，通常能出现清晰分层（缓冲液层、基质胶层、类器官沉淀层），此时弃掉上清和基质胶层，保留类器官沉淀即可。如果依然是两层（缓冲液层和基质胶细胞团混悬液层），此时弃掉缓冲液和上1/3的基质胶细胞团混悬液，保留下2/3即可。
a 离心机的选择非常重要，水平角离心机相比固定角离心机更利于基质胶和类器官分离；
b 离心机的温度最好是4℃（可避免基质胶固化），离心转速可适当提高（最高不要超过500g），离心时间可适当加长（最常不超过10min）。
密度建议1：对于类器官数量较少的情况，为了维持生长所需的旁分泌信号，需要2-3孔富集到1孔，例如，24孔板收集6孔，2孔富集1孔，铺3孔，需要的基质胶量25*3=75uL
密度建议2：500个细胞团/25uL基质胶（如果想计数接种，可以参照此密度建议）
注意：不管是按密度建议1还是按密度建议2，如果有残留的基质胶，新胶量至少是残留胶量的1.5倍
向细胞团沉淀加入基质胶(abs9495)，进行吹打混匀（不要满吹满打，容易产生气泡），然后进行点板。整个操作在金属冰盒或冰上进行。操作熟练以后，加胶，混匀，点板控制在半分钟内，有利于保持基质胶良好的流畅性。
将铺好的培养板放入37℃培养箱中40-60min成胶，添加500-750μL类器官培养基 A进行培养。大概7-10天，多数类器官直径在200-300um，可进行再次传代。
在类器官指数增长期冻存（等到该传代的时候类器官活性比指数期差），也就传代后的Day3-Day4，多数类器官直径在100um-200um，这个时机选择冻存。
1、收集：移液器吸去培养基，每孔添加1-2mL左右4℃类器官传代培养缓冲液G，轻柔吹散基质胶，收集在15mL离心管中（24孔板，每5孔为一组）。
2、洗涤：加类器官传代培养缓冲液G定容至14mL（缓冲液越多，基质胶被稀释的越充分，越容易去除），4℃静置 40min或-20℃放置5min（目的是使基质胶软化，如果冰箱保温效果强，缩短冷冻时间，摸索合适的冷冻时间时，可取出离心管摇晃看不到基质胶说明冷化好了）。
3、接下来将离心管进行300g，南宫28官网4℃，离心5min，离心完通常会有这两种情况：
第一种是正常情况，分成三层（如下图），此时弃掉上清和基质胶层，保留类器官沉淀即可。
第二种是不正常情况，分成两层（如下图），这种情况可能与冷化不充分有关。此时弃掉缓冲液，留下基质胶类器官混悬液，重复上一步洗涤步骤，再次冷化离心，通常能出现清晰分层（缓冲液层、基质胶层、类器官沉淀层），此时弃掉上清和基质胶层，保留类器官沉淀即可。如果依然是两层（缓冲液层和基质胶类器官混悬液层），此时弃掉缓冲液和上1/3的基质胶类器官混悬液，保留下2/3即可。
a 离心机的选择非常重要，水平角离心机相比固定角离心机更利于基质胶和类器官分离；
b 离心机的温度最好是4℃（可避免基质胶固化），离心转速可适当提高（最高不要超过500g），离心时间可适当加长（最常不超过10min）。
密度建议2：500个类器官/mL冻存液（如果想计数冻存，可以参照此密度建议）
2、添加适量类器官冻存液F，轻柔吹打重悬，建议立即进行冻存。（放置太久，DMSO对类器官有损伤）
3、梯度冻存：将冻存管放入梯度冻存盒然后保存至-80℃过夜，第二天取出放入液氮罐。
手动冻存：4℃冰箱放置30min，转移至-20℃放置1h，然后移至-80℃过夜，第二天取出放入液氮罐。
2、细胞实验室进行常规消毒，用预防喷雾喷涂并且使用紫外线min的超净工作台台面；
1、迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中解冻，并要不断地摇动，使管中地液体迅速融化。
2、约1-2min后冻存管内液体wan全溶解，取出用酒精棉球擦拭冻存管地外壁，再拿入超净台内。
四、将类器官冻存液移入15mL离心管，添加10倍体积类器官传代培养缓冲液G（缓冲液体积：冻存液体积=10:1）重悬，轻柔吹打混匀，300g 4℃离心5min，弃上清。
复苏密度建议2：250个类器官/25uL基质胶（如果想计数接种，可以参照此密度建议）
向类器官沉淀加入基质胶(abs9495)，进行吹打混匀（不要满吹满打，容易产生气泡），然后进行点板。整个操作在金属冰盒或冰上进行。操作熟练以后，加胶，混匀，点板控制在半分钟内，有利于保持基质胶良好的流畅性。
将铺好的培养板放入37℃培养箱中40-60min成胶，添加500-750μL类器官培养基A进行培养。大概10-14天，多数类器官直径在200um-500um，可进行传代操作。
爆款产品：试剂盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化检测、残留检测、多因子检测)；细胞培养(类器官试剂盒+基质胶，胎牛血清+培养添加剂+细胞因子)、分化试剂盒；分子(mRNA合成服务+提取试剂盒)；化合物大包装；辅助试剂、耗材/仪器、定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...
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