3.5 cm培养皿、400目细胞筛、12孔板、6孔板、冻存管、15 mL离心管、外科手术刀、外科手术剪、医用镊、二氧化碳培养箱、微量移液器、细胞计数仪、超纯水系统、超低温冰箱、实体解剖镜

　　②脱臼法处死小鼠，用外科手术器械打开腹腔，取出双侧睾丸，置于培养皿中，去除白膜，将睾丸用DPBS洗2～3遍。

　　④将胶原酶Ⅳ小心去除，然后用DPBS轻轻洗两遍，去除D-PBS，加入0.8 mL0.25%胰蛋白酶和0.2 mL 7mg/mLDNase，37℃培养箱中孵育10 min。取出后用1 mL移液器充分吹打至细胞完全分散。

　　et.al., 2005)。此时只有很少量的生殖细胞和大部分贴壁生长的体细胞残留在明胶铺被的12孔板上，而第二块板上生殖细胞相对富集(Oatleyet.al., 2006)。

　　③吸尽培养液，用DPBS轻轻洗两遍，每孔加入200 μl0.25%胰蛋白酶，37℃培养箱内孵育4 min，然后每孔加入1 mL细胞基础培养液终止胰蛋白酶反应。收集细胞悬液至15 mL离心管，室温1500 r/min离心5 min。弃上清后用精原干细胞培养液重悬细胞，按照1:1的比例重新铺板。克隆长到原来的大小大约需要10天，这时候将细胞再传一代（传代比例1:2）。

　　①从第三代开始，将细胞接种到丝裂霉素C处理过的小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）上。从分离开始30天左右细胞可以稳定传代。

　　将冻存管置于37℃水浴锅，使细胞悬液迅速融化，然后将细胞悬液加入第①步的离心管中。

　　室温1500 r/min离心5 min，去除上清，加入精原干细胞培养液重悬后接种到铺有饲养层细胞的培养皿上。

　　2016-04-17本文来源：延伸阅读胚胎小鼠纹状体神经干细胞分离培养鉴定_原代传代培养

　　实验材料孕13d的昆明种二级小鼠试剂、试剂盒胎牛血清青霉素链霉素胰酶阻断剂葡萄糖台盼蓝蔗糖酚红磷酸氢二钾磷酸氢二钠FITC 偶联荧光抗小鼠二抗氯化钠氯化钾碘酒乙醇仪器、耗材解剖剪虹膜剪眼科剪离心机自动双重纯水蒸馏器微孔滤膜滤器培养箱体视显微镜无菌超净工作台培养瓶96孔细胞培养板24孔细胞培养板6 孔细胞培养板倒置显微镜荧光显微镜光学显微镜 方法： 神经干细胞的培养 ①原代细胞的培养：取孕132016-04-03

　　Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞 实验方法原理Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低（2016-04-05

　　实验概要血细胞是免疫学研究或临床检验常用的检测对象或试验材料，分离和纯化血细胞是实验室中的基本技术。目前分离血细胞的技术大多是根据各种细胞群特有的大小、南宫28娱乐平台沉降率、粘附性和吞噬能力等设计而成。实验原理外周血液中的红细胞与白细胞的比例在几百甚至上千比一，两类细胞的大小和密度不同，其沉降速度也就不同，红细胞自然沉降率较快，加入高分子量的聚合物如明胶或右旋糖酐，还可加速其凝聚。另外，用低渗溶液处理红细胞可使2016-04-19

　　实验概要本文介绍了原代细胞分离技术，包括悬浮细胞的分离方法和实体组织材料的分离方法。实体组织材料的分离方法有机械分散和消化分离两种。实验步骤1. 悬浮细胞的分离方法   1) 将血液、羊水、胸水或腹水等悬液直接转至离心管中，1000rpm/分钟离心5分钟。   2) 去掉上清，离心沉淀用无钙、镁的PBS清洗后1000rpm/分钟离心5分钟。此步重复两次。   3) 用培养基重悬，调整适当细胞浓度后2016-04-20

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